Ho Fetola Phetoho ea Phetoho ea Liphatsa tsa Lefutso: Tsoelo-pele Theknolojing ea CRISPR/Cas Litšebelisong tsa Biomedical
Theknoloji ea CRISPR/Cas, eo qalong e ileng ea fumanoa e le sistimi ea 'mele ea ho itšireletsa mafung e ikamahanyang le maemo ho li-prokaryotes ho lemoha le ho khaola li-nucleic acid tse hlaselang, e fetohile sesebelisoa se matla sa ho hlophisa liphatsa tsa lefutso liseleng tsa liphoofolo tse anyesang. Protheine ea SpCas9, e nkiloeng ho Streptococcus pyogenes, ke protheine ea pele ea Cas e sebelisitsoeng hape bakeng sa ho hlophisa liphatsa tsa lefutso, e itšetlehile ka RNA ea tataiso ea maiketsetso (sgRNA) ho shebana le tatellano e itseng ea nucleotide ka har'a genome.
SgRNA e na le tatellano ea scaffold e hlokahalang bakeng sa ho tlama Cas9 le spacer ea 20-nucleotide e ka fetoloang e hlalosang sepheo sa genomic. Bakeng sa likheo tse sebetsang tsa double-strand (DSB), tatellano ea spacer e tlameha ho fihlela litekanyetso tse peli: ha ea lokela ho kopana ka botlalo le DNA e 'ngoe ea genomic 'me e tlameha ho ba haufi le tatellano ea protospacer asidentife motif (PAM), e leng ea bohlokoa bakeng sa ho tlama Cas9.
Mosebetsi oa ho seha habeli oa Cas9 o itšetlehile ka libaka tsa eona tse peli tse sebetsang, RuvC le HNH, e leng se lumellang ho thehoa ha DSB ka nepo. Bafuputsi ba thehile mefuta e fapaneng ea lits'ebetso ba sebelisa sistimi ea CRISPR/Cas, ho kenyeletsoa:
-
Tlhahlobo ea ho Knockout ea Genome eohle: Ka ho haha laeborari e felletseng ea sgRNA le ho sebelisa khatello e khethiloeng, bafuputsi ba ka tseba liphatsa tsa lefutso tse hlokahalang bakeng sa ho phela ha sele tlas'a maemo a fapaneng.
-
Ho kenya tshebetsong ha dijini le kgatello: Ba sebelisa dCas9, e se nang ts'ebetso ea nuclease, bafuputsi ba ka laola tlhahiso ea liphatsa tsa lefutso ka ho kopanya dCas9 le li-activator tsa transcription kapa li-repressor, e leng se nolofalletsang ho hlahloba ka botlalo mesebetsi ea liphatsa tsa lefutso.
-
Phetoho ea Epigenetic: dCas9 e ka etsoa hore e fetole DNA kapa histones, e leng se lumellang liphetoho tse reretsoeng epigenetic tse ka eketsang kapa tsa khutsisa tlhahiso ea liphatsa tsa lefutso.
-
Setšoantšo sa Chromatin: Ka ho kopanya dCas9 le liprotheine tse khanyang, bo-rasaense ba ka bona libaka tse itseng tsa genomic liseleng tse phelang, ho ntlafatsa kutloisiso ea rona ea matla a chromatin.
-
Tlhahlobo ea Liprotheine tse Tlamang tsa DNA/RNA: Ho kopanya CRISPR/Cas le mahlale a ho ngola mabitso a haufi ho nolofalletsa ho tsebahatsa liprotheine tse sebelisanang le libaka tse itseng tsa genomic.
-
Tsoelo-pele ea Limolek'hule: Sistimi ena e ka hlahisa diphetoho tse fapaneng tatellanong ya DNA e rerilweng, e leng se thusang ho ithuta mosebetsi wa jini tlasa kgatello e kgethilweng.
-
Ho Kenngwa ha Transposon-Mediated: Ka ho kopanya liprotheine tsa Cas le li-transposase, bafuputsi ba ka fihlella kopanyo e sebetsang ea DNA ea kantle ho genome.
-
Ho Hlakola Karolo e Kgolo: Sistimi ea CRISPR-Cas3 e lumella ho tlosoa ha tatellano e kholo ea DNA, e fanang ka mekhoa e mecha ea phekolo bakeng sa tšoaetso ea vaerase.
-
Polokelo ea Memori: Li-gRNA tse ikemelang li ka hlahisa liphetoho tse sa feleng tse sebetsang e le matšoao a baeloji bakeng sa liketsahalo tse itseng, e leng se bulang tsela bakeng sa ho latela likarabo tsa sele ka tsela e tsoetseng pele.
-
Ho lemoha vaerase: Mekhoa ea CRISPR/Cas e sebelisitsoe ka katleho ho lemoheng ka potlako likokoana-hloko, ho kenyeletsoa HIV le SARS-CoV-2, e leng se ntlafatsang bokhoni ba ho hlahloba.
-
Mekhoa e Mecha ea Kalafo ea Liphatsa tsa Lefutso: Ho hlahisoa ha moriana oa pele oa ho lokisa liphatsa tsa lefutso o thehiloeng ho CRISPR/Cas9, CASGEVY™, ho emela ntlha ea bohlokoa ho phekoleng lefu la sele ea sickle (SCD) le β-thalassemia (TDT) e itšetlehileng ka tšelo ea mali. Moriana ona, o amohetsoeng libakeng tse ngata, o totobatsa monyetla oa ho fetola liphatsa tsa lefutso ho fetola mekhoa ea phekolo.
Ha lefapha la ho hlophisa liphatsa tsa lefutso le ntse le tswela pele, ditshebediso tsa theknoloji ya CRISPR/Cas di ntse di hola ka potlako. Ka matsete a maholo a mmuso ho theknoloji ya baeloji le bongaka bo nepahetseng, ho na le diphetoho tse tswelang pele mekhoeng ya kalafo ya ho hlophisa liphatsa tsa lefutso bakeng sa mafu a fapaneng, ho kenyeletswa le mathata a lefutso, mofetshe, le Mafu a ho Itšireletsa 'Meleng.